石蜡切片免疫组化WGA实验操作-上海郑核

一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称 厂家 型号

脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J

包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5

病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016

冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5

组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P

烤箱 上海慧泰仪器制造有限公司 DHG-9140A

载玻片 Servicebio

盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 10212432C

脱色摇床 Servicebio TSY-B

涡旋混合器 Servicebio MX-F

掌上离心机 Servicebio D1008E

移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573

组化笔 Gene tech GT1001

正置荧光显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse C1

成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

2、主要实验试剂

试剂 厂家 货号 稀释比

无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司

二甲苯 国药集团化学试剂有限公司

PBS缓冲液 Servicebio G0002

WGA Thermo Fisher W21405

DAPI Servicebio G1012

抗荧光淬灭封片剂 Servicebio G1401

二、石蜡切片免疫荧光实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

2、染色：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加稀释好的WGA染液，避光恒温箱37°孵育30min。

3、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

4、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

5、镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光

三、石蜡切片免疫荧光结果判读

DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光。

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